Ensiklopedia Dunia

Temukan artikel dan sumber daya untuk membantu menjawab pertanyaan Anda.

Sitotoksisitas yang bergantung pada komplemen

Sitotoksisitas yang bergantung pada komplemen (Bahasa Inggris: Complement-dependent cytotoxicity, disingkat CDC) merupakan fungsi efektor dari IgG dan IgM. Ketika keduanya terikat pada antigen permukaan pada sel target (misalnya, sel yang terinfeksi bakteri atau virus), jalur komplemen klasik dipicu oleh protein pengikat C1q pada antibodi ini, yang mengakibatkan pembentukan kompleks serangan membran (MAC) dan lisis sel target.

Sistem komplemen diaktifkan secara efisien oleh antibodi IgG1, IgG3, dan IgM manusia, secara lemah oleh antibodi IgG2, dan tidak diaktifkan oleh antibodi IgG4.[1]

Sistem komplemen merupakan salah satu mekanisme kerja yang memungkinkan antibodi terapeutik[2] atau fragmen antibodi[3] mencapai efek antitumor.[4][5]

Penggunaan uji CDC

Antibodi terapeutik

Pengembangan antibodi terapeutik antitumor melibatkan analisis in vitro fungsi efektornya, termasuk kemampuan memicu CDC untuk membunuh sel target. Pendekatan klasik adalah menginkubasi antibodi dengan sel target dan sumber komplemen (serum). Kemudian, kematian sel ditentukan dengan beberapa pendekatan:

  • Metode radioaktif: sel target diberi label dengan 51Cr sebelum uji CDC, kromium dilepaskan selama lisis sel, dan jumlah radioaktivitas diukur.[6][7]
  • Pengukuran aktivitas metabolik sel hidup (pewarnaan sel hidup): setelah inkubasi sel target dengan antibodi dan komplemen, pewarna permeabel membran plasma ditambahkan (misalnya kalsein-AM[7][8] atau resazurin[6][9]). Sel hidup memetabolismenya menjadi produk fluoresensi impermeabel yang dapat dideteksi dengan sitometri alir. Produk ini tidak dapat terbentuk pada sel mati yang tidak aktif secara metabolik.
  • Pengukuran aktivitas enzim intraseluler yang dilepaskan: sel mati melepaskan enzim (misalnya LDH atau GAPDH)[6] dan penambahan substratnya menyebabkan perubahan warna, yang biasanya diukur sebagai perubahan absorbansi atau luminisens.
  • Pewarnaan sel mati: pewarna (fluoresensi) masuk ke dalam sel mati melalui membran plasma yang rusak. Misalnya, propidium iodida berikatan dengan DNA sel mati dan sinyal fluoresensi diukur dengan flow cytometry.[6]

Pengetikan HLA dan uji crossmatch

Uji CDC digunakan untuk menemukan donor yang cocok untuk transplantasi organ atau sumsum tulang, yaitu donor dengan fenotipe sistem histokompatibilitas HLA yang cocok.[10]

Bentuk pengetikan HLA CDC (dengan kata lain pengetikan serologis) menggunakan sejumlah antibodi anti-HLA dari antiserum alogenik atau antibodi monoklonal yang telah dikarakterisasi. Antibodi ini diinkubasi satu per satu dengan limfosit pasien atau donor dan sumber komplemen. Jumlah sel mati (dan dengan demikian hasil positif) diukur dengan pewarnaan sel mati atau hidup. Saat ini, pengetikan CDC digantikan oleh pengetikan molekuler, yang dapat mengidentifikasi urutan nukleotida molekul HLA melalui PCR.[10]

Uji CDC biasanya digunakan untuk melakukan uji crossmatch. Versi dasarnya melibatkan inkubasi serum pasien dengan limfosit donor dan inkubasi kedua setelah penambahan komplemen kelinci. Adanya sel mati (tes positif) berarti donor tidak cocok untuk pasien ini. Terdapat modifikasi yang tersedia untuk meningkatkan sensitivitas tes, termasuk perpanjangan waktu inkubasi minimal, penambahan globulin antimanusia (AHG), penghilangan antibodi tak terikat sebelum penambahan komplemen, dan pemisahan subset sel T dan sel B. Selain uji silang CDC, tersedia uji silang flow-cytometric yang lebih sensitif dan bahkan dapat mendeteksi antibodi non-pengaktif komplemen.[11]

Referensi

  1. ^ Schroeder, Harry W.; Cavacini, Lisa (2010). "Structure and function of immunoglobulins". Journal of Allergy and Clinical Immunology. 2010 Primer on Allergic and Immunologic Diseases. 125 (2, Supplement 2): S41 – S52. doi:10.1016/j.jaci.2009.09.046. ISSN 0091-6749. PMC 3670108. PMID 20176268.
  2. ^ The Role of Complement in the Mechanism of Action of Rituximab for B-Cell Lymphoma: Implications for Therapy. Zhou 2008
  3. ^ Complement dependent cytotoxicity activity of therapeutic antibody fragments is acquired by immunogenic glycan coupling. Diarsipkan 2016-04-09 di Wayback Machine.
  4. ^ Meyer, Saskia; Leusen, Jeanette HW; Boross, Peter (2014). "Regulation of complement and modulation of its activity in monoclonal antibody therapy of cancer". mAbs. 6 (5): 1133–1144. doi:10.4161/mabs.29670. ISSN 1942-0862. PMC 4622586. PMID 25517299.
  5. ^ Wang, Xinhua; Mathieu, Mary; Brezski, Randall J. (2018). "IgG Fc engineering to modulate antibody effector functions". Protein & Cell. 9 (1): 63–73. doi:10.1007/s13238-017-0473-8. ISSN 1674-800X. PMC 5777978. PMID 28986820.
  6. ^ a b c d Taylor, Ronald P.; Lindorfer, Margaret A. (2014). "The role of complement in mAb-based therapies of cancer". Methods. 65 (1): 18–27. doi:10.1016/j.ymeth.2013.07.027. ISSN 1095-9130. PMID 23886909.
  7. ^ a b Hernandez, Axel; Parmentier, Julie; Wang, Youzhen; Cheng, Jane; Bornstein, Gadi Gazit (2012). "Monoclonal antibody lead characterization: in vitro and in vivo methods". Antibody Engineering. Methods in Molecular Biology. Vol. 907. hlm. 557–594. doi:10.1007/978-1-61779-974-7_32. ISBN 978-1-61779-973-0. ISSN 1940-6029. PMID 22907374.
  8. ^ Gillissen, M.A.; Yasuda, E.; de Jong, G.; Levie, S.E.; Go, D.; Spits, H.; van Helden, P.M.; Hazenberg, M.D. (2016). "The modified FACS calcein AM retention assay: A high throughput flow cytometer based method to measure cytotoxicity". Journal of Immunological Methods (dalam bahasa Inggris). 434: 16–23. doi:10.1016/j.jim.2016.04.002. PMID 27084117.
  9. ^ Gazzano-Santoro, Hélène; Ralph, Peter; Ryskamp, Thomas C; Chen, Anthony B; Mukku, Venkat R (1997). "A non-radioactive complement-dependent cytotoxicity assay for anti-CD20 monoclonal antibody". Journal of Immunological Methods (dalam bahasa Inggris). 202 (2): 163–171. doi:10.1016/S0022-1759(97)00002-1. PMID 9107305.
  10. ^ a b Gautreaux, Michael D. (2017), Orlando, Giuseppe; Remuzzi, Giuseppe; Williams, David F. (ed.), "Chapter 17 - Histocompatibility Testing in the Transplant Setting", Kidney Transplantation, Bioengineering and Regeneration, Academic Press: 223–234, doi:10.1016/B978-0-12-801734-0.00017-5, ISBN 9780128017340, diakses tanggal 2019-08-30
  11. ^ Guillaume, Nicolas (2018). "Improved flow cytometry crossmatching in kidney transplantation". HLA. 92 (6): 375–383. doi:10.1111/tan.13403. ISSN 2059-2310. PMID 30270577. S2CID 52893602.

Konten ini disalin dari wikipedia, mohon digunakan dengan bijak.

Toploker.com

Beranda

Program Studi

Karirnews
×
Advertisement